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活性炭改性纤维对淀粉酶的吸附
α-淀粉酶属于广泛用于食品、造纸、纺织、酿酒、发酵和酿造行业的酶组。由α-淀粉酶(1,4a-d葡聚糖葡聚糖水解酶)催化的淀粉水解为低分子量产品是最重要的商业酶促过程之一。许多研究人员研究了α-淀粉酶的固定化。例如,α-淀粉酶通过吸附固定在氧化锆或氧化铝上并表现出更高的活性,它被共价固定在含有邻苯二甲酰氯的氨基官能化玻璃珠上,在蛋白质上的氨基和酰氯基团之间形成酰胺键在玻璃表面。α-淀粉酶也通过游离的-CHO(按照烷基胺和戊二醛程序)与酶的-NH2反应固定在改性有序介孔二氧化硅中,用于水解淀粉,提高了固定化酶的热稳定性和pH稳定性。活性炭纤维虽然表现出发达的孔隙结构,但由于其表面化学性质一般为疏水性,氧氮含量极少,不能与酶发生强烈的相互作用,因此并未广泛用作酶载体。因此有必要研究改性活性炭纤维作为酶载体材料的性能。
活性炭因其高表面积和大孔体积而被广泛用作吸附剂、催化剂/催化剂载体、电子材料和储能材料。活性炭纤维的优点是纤维直径较小,可最大限度地减少扩散限制并允许快速吸附/解吸,孔径分布更集中。新型活性炭已广泛用于分离、纯化和催化过程。活性炭纤维的化学氧化是将杂原子引入其表面的常用方法。各种试剂已被用作氧化剂:浓硝酸或硫酸、次氯酸钠、高锰酸盐、重铬酸盐、过氧化氢、过渡金属、臭氧基气体混合物等。在各种氧化处理中,硝酸的氧化是最广泛使用的方法用于增加湿氧化处理产生的总酸度。活性炭纤维表面的含氧和含氮基团可以在300℃下通过硝化纤维素燃烧氧化引入,改性后的活性炭对氨和二硫化碳具有更高的吸附能力。
活性炭改性纤维
活性炭纤维的氧化改性。在120℃下干燥2h以去除吸附的蒸汽和有机分子,然后用硝酸纤维素丙酮溶液浸渍,负载量固定为1wt.%的硝酸纤维素在室温下放置4小时。最后,将浸渍的活性炭纤维在空气中加热至300℃持续30分钟,并标记为活性炭改性纤维。活性炭-0在5M硝酸中改性12小时,然后用蒸馏水浸出,直至达到约7的pH值。最后,在80℃下干燥并命名为活性炭-HNO3。
淀粉酶的吸附和淀粉的水解。在吸附实验中,将1g活性炭纤维与等体积的0.1M磷酸盐缓冲液和α-淀粉酶溶液混合。在室温下振摇1小时,然后过滤。α-淀粉酶的吸附量为原酶液水解能力与滤液水解能力之差。
在间歇反应器中检测游离酶和固定化酶的水解活性。通过将可溶性淀粉溶解在蒸馏水中制备%淀粉溶液,并通过0.1M/HCl将pH值调节至4.7。然后将1g含有α-淀粉酶的活性炭纤维置于测试小瓶中。随后,加入100cm3的淀粉溶液,并将系统在40℃下不断摇动的水浴中孵育。每10分钟抽取1cm3溶液以确定水解麦芽糖的量。通过加入1cm3的3,5-二硝基水杨酸试剂终止反应。还在沸水浴中孵育5分钟。还原糖(麦芽糖)的量通过分光光度法在540nm处测定。
活性炭样品的SEM样貌
活性炭纤维的SEM图像如图1所示。活性炭-0的表面看起来很光滑,表面的斑点是吸附的污垢。活性炭-HNO3表面的污垢最少,大部分污垢在硝酸浸渍过程中被浸出。这也说明硝酸氧化不会损伤纤维表面。活性炭表面的污染比活性炭-0少,在硝化纤维浸渍过程中,一些杂质被洗掉,这表明所有的硝化纤维素都已完全燃烧。通过比较SEM图像,活性炭纤维表面在硝酸氧化和硝化纤维素燃烧后没有被破坏。这证明了在活性炭纤维表面引入氮/氧原子是一种简单的方法,并且不会对表面造成损伤。
图1:活性炭的SEM照片(a)活性炭-0(b)活性炭改性纤维和(c)活性炭-HNO3。
淀粉酶的吸附和淀粉的水解
三种活性炭对α-淀粉酶的吸附量为2.0mg/g,分别为9.9毫克/克和7.9毫克/克。由于活性炭的孔结构相似,表面含氧和含氮基团是表征a-淀粉酶吸附的唯一显着影响因素,尤其是酚羟基,它可以与a-淀粉酶的-NH2形成氢键分子。与游离α-淀粉酶相比,固定在活性炭-0、活性炭纤维和活性炭-HNO3上的α-淀粉酶的水解活性分别降低了20%、48%和34%。这表明α-淀粉酶的活性位点受活性炭纤维孔结构的影响,从而改变了α-淀粉酶与淀粉分子之间的相互作用。此外,固定化的α-淀粉酶分子固定在孔通道和传质也受到限制,因此表观水解活性降低。
图2:吸附在活性炭改性纤维上的α-淀粉酶水解淀粉:(a)1wt.%,(b)2wt.%和(c)5wt.%。
图3:吸附在活性炭-HNO3上的α-淀粉酶水解淀粉:(a)1wt.%,(b)2wt.%和(c)5wt.%。
固定化α-淀粉酶水解淀粉在相同活性炭上的α-淀粉酶水解的麦芽糖的量与淀粉浓度无关。麦芽糖也被α-淀粉酶水解:结果表明,如果固定发生在相同的活性炭上,则水解麦芽糖和水解淀粉的量保持不变。这表明淀粉浓度是足够的。固定在ACF上的淀粉酶的量越大,水解麦芽糖的量就越高。对于活性炭-0,第一次运行60分钟后水解麦芽糖的量为20mg。第二轮下降到12毫克,第三轮下降到8毫克。对于活性炭改性纤维,第一次运行60分钟后水解麦芽糖的量为100mg。吸附的淀粉酶在运行3次后仍保持较高的水解活性。第四次运行后其活性下降,麦芽糖量为50毫克。对于活性炭,第一次运行60分钟后水解麦芽糖的量为50mg。吸附的淀粉酶在两次运行后保持较高的水解活性。3次运行后其活性降低,麦芽糖量为20mg。固定化酶最重要的优点是它的可重复使用性。活性炭纤维的表面基团也影响α-淀粉酶的解吸行为。固定在活性炭-0上的α-淀粉酶在水解过程中大部分会被解吸,2次运行后固定在活性炭-0上的α-淀粉酶的保留活性为10%。然而,固定在改性活性炭和活性炭-HNO3上的α-淀粉酶在4次运行后表现出超过24%和14%的活性。
活性炭可以被硝酸氧化和硝化纤维素燃烧以改变其表面化学性质。活性炭纤维氧化后碳含量显着降低,氧含量显着升高。氢、氮含量也有一定程度的增加。Boehm滴定和FTIR结果表明,HNO3氧化引入了大量的羧基。而硝酸纤维素氧化可形成酚基和碱性基团(酰胺)。吸附分别增加了5倍和3.5倍。固定化淀粉酶在3次运行后显示出更高的淀粉水解活性。
文章标签:椰壳活性炭,果壳活性炭,煤质活性炭,木质活性炭,蜂窝活性炭,净水活性炭.推荐资讯
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